Lep IgG鉤端螺旋體IgGELISA試劑盒

我司提供的試劑僅供研究使用       

實(shí)驗目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中Lep IgG鉤端螺旋體IgG的含量。

實(shí)驗原理：

上海試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預先包被Lep IgG鉤端螺旋體IgG的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中Lep IgG鉤端螺旋體IgG呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度

試劑盒組成：

操作步驟：

鉤端螺旋體IgG試劑盒方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚板的反應孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌，下同)。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽(yáng)性對照孔)。

3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M0.05ml。

6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀(guān)察結果：反應孔內顏色越深，陽(yáng)性程度越強，陰性反應為無(wú)色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

　　鉤端螺旋體IgGELISA方法二　用于檢測未知抗體的間接法：　　　

　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

注意事項：

1.　正式試驗時(shí)，應分別以陽(yáng)性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以實(shí)驗結果的準確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2.　在酶聯(lián)ELISA試劑盒中，進(jìn)行各項實(shí)驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

(1)　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反應，觀(guān)察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時(shí)，觀(guān)察陽(yáng)性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。

(3)　酶標記抗體工作濃度的選擇：用直接ELISA檢測試劑盒法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗系統里準確地滴定其工作濃度。

(4)　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應，而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒 Mouse nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit

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補體C3a過(guò)敏毒素抗體

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心肌缺血預處理正調節蛋白2抗體

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犬肌酐(Cr)試劑盒 Canine Creatinine,CR ELISA KIT

人糖鏈抗原19-9(CA19-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

跨膜蛋白SEMA5B抗體  Anti-Semaphorin 5B  WB IHC-P IHC-F IF  100ul

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化蛋白激酶C/p-PKC ε抗體

兔子透明質(zhì)酸(HA)ELISA檢測試劑盒rabbitHyaluronicacid,HAELISAKit 96T/48T

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Lep IgG鉤端螺旋體IgGELISA試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體20抗體

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  胰酶細胞消化液(不含EDTA)

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