PCR檢測試劑盒有效期一般為1年，這是指在適當的儲存溫度下。核酸擴增部分的試劑一般要貯存于-20℃下，產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復凍融。天津

產(chǎn)品名稱(chēng)：人肥胖易感基因825T PCR測定試劑盒

產(chǎn)品貨號：LZ-P1761

分類(lèi)：PCR檢測試劑盒

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。

運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門(mén)。

【結果分析條件設定】

u 基線(xiàn)（Baseline）設定：應選擇該次實(shí)驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域（所有樣本熒光信號無(wú)較大波動(dòng)），起始點(diǎn)（Start）應避開(kāi)熒光采集起始階段的信號波動(dòng)，終止點(diǎn)（End）應比早出現指數擴增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán)，建議基線(xiàn)設為6~15。

u 閾值(Threshold)設定：將閾值線(xiàn)設定在剛好超過(guò)正常陰性質(zhì)控品擴增曲線(xiàn)的高點(diǎn)。

【質(zhì)控標準】

1. 人肥胖易感基因825T 陰性質(zhì)控品的檢測結果應為陰性，無(wú)指數擴增期，Ct=40或無(wú)Ct；

2.   陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測結果應為陽(yáng)性，有明顯的指數擴增期，Ct值應小于等于35；

3.   以上要求需在一次實(shí)驗中同時(shí)滿(mǎn)足，否則該次實(shí)驗視為無(wú)效。

【結果判斷】

1.陽(yáng)性：有明顯的指數擴增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明顯的指數擴增期，且38≤Ct<40，此時(shí)樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復核一次，若復核結果Ct<40且有指數擴增期，則判定為陽(yáng)性，否則判定為陰性；

3.   陰性：無(wú)指數擴增期，Ct=40或無(wú)Ct值均判定為陰性樣本。

PCR反應的特異性決定因素為：

　　?、僖锱c模板DNA特異正確的結合；

　　?、趬A基配對原則；

　　?、跿aq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性；

　　?、馨谢虻奶禺愋耘c保守性。

其中引物與模板的正確結合是關(guān)鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

(2)靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細胞中檢出一個(gè)靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細菌。

(3) PCR檢測試劑盒簡(jiǎn)便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時(shí)完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 熒光定量PCR試劑盒對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR檢測步驟:

1樣品處理

1）按照GB 4789.10-2016（或SN/T 1870-2016），取樣品25g（mL），加入到含有225mL 7.5% NaCl肉湯的無(wú)菌容器中均質(zhì)，調節pH至6.8±0.2。

2）36±1℃培養18-24h。

注：也可參考其他地方標準進(jìn)行樣品的前處理。

2、核酸提取

1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。

2）冷卻至室溫，吸取上清備用或者置于-20℃保存。

3、反應體系配置

從試劑盒中取出SA預混液，充分融化，短暫離心，然后將陰性對照、樣品的DNA提取液、陽(yáng)性對照各取5μL分別加入PCR管中，蓋好管蓋，短暫離心，立即進(jìn)行PCR擴增反應。

4、PCR擴增

PCR管置于PCR儀上，推薦反應程序設定如下：反應體系為25μL，在第二步每個(gè)循環(huán)60℃時(shí)檢測熒光信號，檢測通道選擇FAM。

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